AAV 腺相关病毒
质粒构建

质粒构建

  和元上海科研服务平台可为基因功能研究者提供前沿、全面、严谨的载体设计和载体构建服务,内容涵盖普通真核表达载体、病毒载体等。
  
  病毒载体构建服务包含慢病毒、腺相关病毒、腺病毒和逆转录病毒载体等,构建内容包括基因过表达载体构建、基因定点突变表达载体构建、用于基因沉默的shRNA设计与构建、microRNA表达与封闭载体设计与构建、萤光素酶报告基因载体构建(UTR、启动子及其它功能序列)以及Cre-LoxP系统和CRISPR/Cas9基因编辑工具载体设计与构建等,力求一站式解决基因功能研究中的基因上调和基因下调需求。
  质粒优势:
  ①表达时间快,导入细胞后约24小时可观察到目的基因表达;
  ②构建技术简单,成本低。
  
  ③和元的过表达载体库丰富,并且过表达的标记丰富
  
  荧光标记:GFP、mCherry、CFP、BFP、EYFP、mNeonGreen、tdTomato、 mScarlet…
  
  标签标记: FLAG、 HA 、Myc、His tag…
  
  抗性标记:Puro、Neo、Hygro、BSD…
  
  局限性:
  
  ①转染试剂具有细胞毒性,使用后影响细胞状态;
  
  ②大部分细胞较难转染,达不到基因操作目的;
  
  ③质粒不整合到细胞基因组,只能进行短时间的瞬时表达,无法进行观察周期较长的实验。
  
  由于单纯质粒存在一定的局限性,根据实验需要需包成病毒进一步满足不同实验的需求。
  不同表达载体的区别
表达系统 真核表达载体 慢病毒载体 重组腺相关病毒载体 重组腺病毒载体
载体基因特性 双链DNA质粒 RNA逆转录病毒 单链DNA病毒 双链DNA病毒
外源基因表达时间 24h开始表达,持续3-7天 2-4天开始表达,长时间稳定表达 7-14天开始表达 1-2天开始表达
插入片段大小 8kb左右 4kb左右 2.8kb左右 6kb左右
稳定细胞株筛选 难操作 可以 不可以 不可以,瞬时表达
细胞实验 细胞系,部分转染效率低 首选,广谱,感染效率高 不适合 广谱,感染效率高
动物实验 不适合 适合,根据观察时间和注射部位 首选,根据观察时间和注射部位 免疫原性高,慎选
滴度范围 108~109TU/ml 1012-1013vg/ml 1010-1011pfu/ml

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