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慢病毒包装流程

时间:2020-03-26 热度: 分享到:

  慢病毒包装流程:

慢病毒包装流程

  1、载体质粒与系统质粒共转染293T细胞。

  2、收集48~72h的细胞上清液。

  3、超速离心纯化浓缩。

  4、纯化分装。

  5、滴度检测。

  具体实验步骤如下:

  一、质粒转染

  1、转染前,依次准备好转染试剂、Opti-MEM培养基、目的质粒、骨架质粒、EP管。

  2、然后,配置质粒和OMEM的混合液。

  3、配置转染试剂和OMEM的混合液。

  4、轻轻混匀,静置5min。

  5、将配好的质粒与转染试剂混合后形成转染体系。

  6、轻轻混匀,静置20min。

  7、从培养箱中取出10cm培养皿,弃去培养液,更换为OMEM培养液。

  8、转染,轻轻混匀。

  9、在培养皿盖上做好标记,放回培养箱继续培养。

  10、转染后6-8h,更换为新鲜的DMEM培养基。

  11、转染后次日,显微镜下观察转染效率。

  12、转染后48h,收集上清液于干净的50ml离心管中。

  13、加入新鲜的DMEM培养基,继续培养。

  14、转染后72h,再次收集上清液。

  二、浓缩纯化

  1、将收集好的上清液离心,弃去细胞碎片。

  2、用0.22μm滤膜过滤,分装到超速离心管中。

  3、超速离心。

  4、离心结束后,将所收获的病毒颗粒重新悬浮,于4℃冰箱中溶解,过夜。

  5、次日,再次将溶解后的病毒过滤、分装、入库。

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