慢病毒 腺相关病毒
质粒工艺开发

质粒工艺开发

菌株库建立
 


 

不同代次(P1/P5/P10)菌体质粒表达量
 

 

连续三批次质粒生长曲线
 

 

纯化工艺开发经验
 

1. 三步层析:
1) 凝胶过滤层析,有效去除宿主DNA残留



 
2) 亲和层析,去除开环质粒


 
3) 阴离子交换层析,去除内毒素


 
 
层析中间过程检测结果

步骤 DNA总(mg) 收率 宿主DNA (μg /mg) 内毒素 (EU/mg) 超螺旋质粒纯度 (HPLC法)
凝胶过滤 88.3 NA 5.6 <200 83.91%
亲和层析 67.9 76.9% 1.5 <3.7 91.46%
离子交换 63.0 92.8% 1.1 <0.34 92.46%
 

稳定性研究
 

时间、温度对质粒纯度及含量变化的影响
 
长期稳定性研究-纯度(%)
 
长期稳定性研究-含量(mg/ml)
 
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