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和元双十一•科研不缺席 | Cre鼠项目服务

时间:2021-11-04 热度: 分享到:

 

随着研究的不断深入,现代神经科学需要关注大量不同种类的神经元或胶质细胞,进行精细研究,除了特异性启动子的应用外,还可以借助多种Cre小鼠模型配合DIO病毒策略或flox小鼠策略以实现特异性操作神经元的目的。
 

Cre-LoxP系统

来源于噬菌体P1的Cre/loxP系统主要包括2个重要组成部分:一个是loxP位点,另一个就是可以对loxP位点进行识别的Cre酶,使两个loxP位点间发生基因重组,实现对目的基因删除、翻转、易位和序列互换。在神经科学领域,此技术可以用于对神经环路的特异性标记、特异细胞类型中内源基因的功能研究及构建小鼠模型等。(更多Cre体系相关内容,可参考【知识分享】一半海水、一半火焰,分子表达操控中高频出现的Cre、Flp、Dre等重组酶系统如何工作)
 

Cre鼠策略

利用基因敲入手段,借助CRISPR/Cas9技术,将Cre重组酶定点插入到小鼠基因组中,获得可特异性在某类神经元中表达Cre的工具鼠,从而可以配合AAV-DIO病毒载体,做到精准操控神经元的目的,亦可以和多种Flox鼠搭配使用,研究不同基因的功能。

以Thy1-iCre工具鼠为例构建策略

 

和元Cre鼠项目

Cre鼠配合重组AAV病毒可在特定脑区实现细胞特异性标记、光遗传学和化学遗传学操纵、在体钙成像记录,或者组织特异性的基因编辑。

 

病毒载体介导的Cre/loxP系统

相较于转基因小鼠,借助病毒载体介导的Cre系统实现特异性操作神经元或基因的目的,同时可以大大缩短实验的周期,另外,多种多样的病毒载体,可以最大限度的满足各类实验的需求。各类病毒载体的特点如下:

 

借助Cre品系的小鼠和Cre依赖表达的病毒载体结合使用,可以达到特异性对某些细胞的标记和操控目的。运用神经示踪技术对大脑特定神经环路的结构和功能进行解析时,亦可以借助Cre重组酶系统和AAV血清型(比如rAAV2/9、rAAV2/retro、rAAV2/1)结合适用,达到特异性对神经环路标记和功能研究的目的。
 
在实际进行实验课题过程中,病毒载体辅助和Cre小鼠的配合使用即有互补性,又能相互验证,成为动物体内研究尤其是神经科学领域研究中不可或缺的助力。
 
 

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