慢病毒 腺相关病毒
基因调控

基因过表达

  基因功能研究中通常需要上调目的基因的表达来观察表型的变化。过表达是将目的基因在宿主细胞大量表达的过程,其基本原理是将目的基因构建到工具载体上,导入细胞使基因实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。工具载体通常包括原核表达载体、普通真核表达载体、慢病毒载体、腺相关病毒载体、腺病毒载体和逆转录病毒载体等。

工具载体介绍


根据实验需要不同,目的基因大小等选择不同的载体,包括真核表达载体和病毒载体等均可以实现编码基因和非编码基因的过表达。

表达系统 真核表达载体 慢病毒载体 重组腺相关病毒载体 重组腺病毒载体
载体基因特性 双链DNA质粒 RNA逆转录病毒 单链DNA病毒 双链DNA病毒
外源基因表达时间 24h开始表达,持续3-7天 2-4天开始表达,长时间稳定表达 7-14天开始表达 1-2天开始表达
插入片段大小 8kb左右 4kb左右 2.8kb左右 6kb左右
稳定细胞株筛选 难操作 可以 不可以 不可以,瞬时表达
细胞实验 细胞系,部分转染效率低 首选,广谱,感染效率高 不适合 广谱,感染效率高
动物实验 不适合 适合,根据观察时间和注射部位 首选,根据观察时间和注射部位 免疫原性高,慎选
滴度范围 108~109TU/ml 1012-1013vg/ml 1010-1011pfu/ml

载体图谱中常见元件介绍

元件名称 类型 用途
启动子 CMV、CBh、CAG、Syn等 广谱或特异启动目的基因的表达
常用标签 EGFP、mCherry、mNeonGreen等 荧光标签,与目的基因非融合表达可检测转染、感染效果
3×Flag、HA 、His等 目的基因融合表达,用于检测
抗性基因 Puromycin、Neo、Hygro等 真核抗性,主要用于稳转株筛选
Ampicillin、Kanamycin 原核抗性,常用于原核细胞筛选
连接元件 IRES、2A 用来连接表达两个基因
其它元件 WPRE 增加目的基因的表达

载体选择(部分)


根据实验需要不同,目的基因大小等选择不同的载体,包括真核表达载体和病毒载体等均可以实现编码基因和非编码基因的过表达。

载体类别 编号 载体元件
慢病毒过表达 H155  pLenti-CMV-MCS-3FLAG
GL121 pSLenti-EF1a-EGFP-CMV-MCS
GL107 pSLenti-EF1a-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3Flag
GL109 pSLenti-EF1a-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS
GL122 首选,广谱,感染效率高
腺病毒过表达 H225  pAdeno-MCMV-MCS-3FLAG
H201 pAdeno-MCMV-EGFP-3FLAG
H213 pAdeno-MCMV-3FLAG-EGFP
腺相关病毒过表达 AOV024  pAAV-CMV-EGFP-2A-MCS-3FLAG
AOV025 pAAV-CMV-mCherry-P2A-MCS-3FLAG
AOV064 pAAV-SYN-EGFP-P2A-MCS-3FLAG
AOV065 pAAV-SYN-mCherry-P2A-MCS-3FLAG
H9429 pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-CW3SL
H9525 pAAV-CMV-MCS-EGFP-3FLAG-CW3SL
H10881  pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-CW3SL
H10886  pAAV-CMV-MCS-EGFP-3FLAG-CW3SL

服务简介

根据客户提供的基因信息,从生物信息学网站上调出该基因的cDNA序列,将cDNA序列构建到工具载体中,根据实验需求过表达编码基因或者非编码基因。针对病毒载体,包装生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。

样本类型病毒载体服务流程

  • 物种及目的基因名称
    病毒载体要求与选择
    其它特殊需求
  • 病毒表达载体构建
    病毒包装与纯化)
    滴度测定
  • 高滴度的病毒颗粒
    按合同提供对照病毒)
    实验报告

相关技术服务

  • 基因干扰

  • CRISPR/Cas9

  • 内源性转录激活/抑制


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