逆转录病毒（Retrovirus），又称反转录病毒，是一种RNA病毒，其两端为长末端重复序列（LTR）。该病毒呈球形，有包膜，表面有刺突，颗粒直径为100nm左右。逆转录病毒基因组有三个基因：Gag-编码病毒的核心蛋白；Pol-编码逆转录酶；Env-编码病毒的被膜糖蛋白。
逆转录病毒基因组
悬浮框：包装纯化及滴度检测--侵染细胞过程--病毒特点--应用案例
逆转录病毒包装纯化及滴度检测
逆转录病毒包装采用三质粒或四质粒系统进行包装，收集细胞培养上清，通过超速离心浓缩纯化和收集病毒。
逆转录病毒包装纯化流程
滴度检测方法：定量PCR检测干扰后细胞基因组中外源DNA拷贝数。
滴度检测原理：逆转录病毒介导外源基因以逆转录方式整合进目的细胞基因组。
逆转录病毒侵染细胞过程
逆转录病毒基因表达时，需在逆转录酶的作用下首先将RNA逆转录成DNA，形成DNA整合前复合体，随后进入细胞核随机整合到宿主细胞DNA上，经过转录、翻译，完成基因的表达。
逆转录病毒作用机制
逆转录病毒特点
逆转录病毒的最大特点在于其特异性感染分裂期细胞，这是因为只有当被感染细胞处于细胞分裂期间，逆转录病毒DNA基因组才能接触到宿主细胞的遗传物质。
基于上述特性，逆转录病毒适用于干细胞相关的大量研究，如神经干细胞研究、造血干细胞研究。体内应用时，逆转录病毒适用于研究成年新生神经元或胶质前体细胞的工作。
不同病毒的生物学特性比较
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慢病毒 |
腺相关病毒 |
腺病毒 |
逆转录病毒 |
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包膜 |
有 |
无 |
无 |
有 |
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颗粒直径 |
90-100 nm |
20-30 nm |
60-90nm |
~100nm |
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基因组 |
dsRNA |
ssDNA |
dsDNA |
RNA |
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表达起始时间 |
48-72h |
72-96h |
24-48h |
48-72h |
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表达持续时间 |
> 2 months |
> 6 months |
< 1 month |
> 2 months |
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体内扩散能力 |
一般 |
强 |
强 |
一般 |
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免疫原性 |
中等 |
极低 |
强 |
中等 |
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滴度范围 |
108~109TU/mL |
1012-1013VG/mL |
1011-1012PFU/mL |
107~108TU/mL |
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滴度检测方法 |
qPCR整合DNA |
qPCR非整合DNA |
抗原抗体免疫染色试剂盒 |
qPCR整合DNA |
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整合方式 |
随机高频整合 |
定向低频整合（rAAV不整合） |
非整合 |
随机整合 |
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应用范围 |
体外细胞感染，gRNA文库筛选，体内 |
基于不同的血清型，体内广泛应用 |
嗜肝，快速表达或短期表达，血液、心脏，细胞系等 |
特异性只感染分裂期的细胞 |
逆转录病毒应用案例
1、客户发表文章：Scientific Reports. (IF=4.122). Xiong Y S,et.al. (2015). Early treatment of minocycline alle-viates white matter and cognitive impairments after chronic cerebral hypoperfusion. [逆转录病毒, 卒中]
注射部位：小鼠侧脑室SVZ区
载体：pROV-EF1a-GFP
病毒载体：逆转录病毒
病毒滴度：1× 108 cfu/mL
注射体积：1ul
2、应用案例：Nature.(IF=41.577).Yu YC,et.al. (2009).Specific synapses develop preferentially among sister excitatory neurons in the neocortex. [逆转录病毒, 发育]
注射部位：E12-E13小鼠胚胎
病毒载体：逆转录病毒
注射体积：1ul
