慢病毒 腺相关病毒
腺病毒ADV

腺病毒ADV

  腺病毒(Adenovirus, ADV)是一种无包膜的线性双链DNA病毒,具有广泛的细胞和组织感染能力。感染过程剧烈,适于短时间内进行基因高表达的实验,与其它病毒相比,腺病毒最大优势在于插入片段较长,表达活性强。
  
  体外应用时,腺病毒载体转基因效率高(接近100%的转导效率),且可转导不同类型的细胞,对于大量难转染细胞的基因递送是一个很好的工具。但是,在体内应用时,由于腺病毒免疫原性强,感染剧烈,故常会引起动物局部组织炎症反应和机体免疫反应,对动物体征和实验结果的客观性造成影响。

腺病毒包装与纯化

  腺病毒包装中表达质粒与穿梭质粒共转染293T细胞,待细胞出现CPE状态后通过收集和过滤细胞裂解物而纯化。
  
  CPE(Cytopathic Effect):病毒对组织培养细胞侵染后产生的细胞变性,利用此种病变效应可进行病毒定量。

腺病毒滴度检测

  检测方法:酶联免疫法腺病毒滴度测定,根据计算感染后染成褐色的阳性细胞数,来计算病毒滴度
  
  实验原理:腺病毒感染的阳性细胞表达的衣壳蛋白被染成褐色
  
  检测方法:免疫显色方法。
  
  实验原理:通过抗5型腺病毒外壳蛋白的单抗与感染腺病毒样品的细胞结合,再用HRP标记的二抗与一抗结合,经显色液显色,被感染的细胞变成褐色,根据阳性细胞数,来计算病毒滴度。

腺病毒载体优势

① 表达快,腺病毒感染细胞后,1-2天即可表达
② 载体容量大,感染效率高,常用于感染难感染的细胞
③ 不整合到染色体中,无插入致突变性
④  具有嗜肝性,易于感染肝细胞,腺病毒的体内应用通过是用于感染肝脏
  不过由于腺病毒免疫原性高,对某些对外源刺激敏感的动物模型和组织中易造成炎症,体内应用需谨慎。
  
  载体选择
  
  和元上海拥有丰富的腺病毒产品,用于操作编码基因和非编码基因,如lncRNA、microRNA、circRNA。以下腺病毒载体可供您选择:
载体用途 载体编号 载体名称(载体元件顺序) 真核抗性 荧光 启动子 默认标签 载体容量
过表达 H225 pAdeno-MCMV-MCS-3FLAG N/A N/A MCMV 3FLAG >6kb
H201 pAdeno-MCMV-EGFP-3FLAG N/A EGFP MCMV 3FLAG >5kb
H202 pAdeno-MCMV-3Flag-IRES2-EGFP N/A EGFP MCMV 3FLAG >5kb
H13913 pAdeno-MCMV-MCS-3FLAG-IRES2-mNeonGreen N/A mNeonGreen MCMV 3FLAG >5kb
H213 pAdeno-MCMV-3FLAG-EGFP N/A EGFP MCMV 3FLAG >5kb
H220 pAdeno-MCMV-EGFP-P2A-MCS-3FLAG N/A EGFP MCMV 3FLAG >5kb
H223 pAdeno-MCMV-DsRed2-P2A-MCS-3FLAG N/A DsRed2 MCMV 3FLAG >5kb
H205 pAdeno-MCMV-HA-P2A-EGFP N/A EGFP MCMV HA >5kb
H221 pAdeno-MCMV-3Flag-P2A-EGFP N/A EGFP MCMV 3FLAG >5kb
H204 pAdeno-MCMV-mCherry-Ha N/A mCherry MCMV HA >5kb
H222 pAdeno-MCMV-3Flag-T2A-mcherry N/A mCherry MCMV 3FLAG >5kb
H12588 pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG N/A mNeonGreen CMV 3FLAG >4kb
H12589 pAdeno-EF1A(S)-mScarlet-CMV-MCS-3FLAG N/A mScarlet CMV 3FLAG >4kb
circRNA
过表达
H6946 pAdeno-CMV-CCDB N/A N/A CMV N/A >5kb
miRNA
过表达
H216 pAdeno-U6-Mir30-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
干扰 DKD001 pDKD-CMV-eGFP-U6-shRNA N/A EGFP U6 N/A N/A
DKD004 pDKD-CMV-mcherry-U6-shRNA N/A mCherry U6 N/A N/A
H7045 pDKD-CMV-MCS-U6-shRNA N/A N/A CMV/U6 N/A N/A
CRISPR敲除 H5064 pAdeno-U6-spgRNA v2.0-CMV-3Flag-spCas9 N/A N/A U6 N/A N/A
H9350 pAdeno-U6-spgRNAv2.0-CMV-sfGFP-P2A-3Flag-spCas9 N/A sfGFP U6 N/A N/A
H5066 pAdeno-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
H218 pAdeno-CMV-mCherry-T2A-3Flag-spCas9 N/A mCherry CMV N/A N/A
H5449 pAdeno-CMV-mCherry-T2A-3Flag-eSpCas9_1.1 N/A mCherry CMV N/A N/A

应用实例

  1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝脏]
  
  注射部位:肝脏
  
  载体名称:Ad-CBS
  
  注射方式:尾静脉
  
  注射量:10ul,1 x1011 PFU/mL
  
  检测时间:1周
  
  2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝脏]
  
  注射部位:肝脏
  
  载体名称:Ad-ATG7
  
  注射方式:尾静脉
  
  注射量:1 x109 PFU /mice
  
  检测时间:10天
  
  3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]
  
  注射部位:大鼠大脑皮层
  
  载体名称:Ad-FBLN
  
  注射方式:脑立体定位注射
  
  注射量:三种不同剂量
  
  检测时间:7天
  
  和元生物腺病毒的生产和指控采取了国际学术界公认的标准流程,采用二质粒系统在293细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速梯度离心和过滤,并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定。一般情况下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。

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