菌株库建立
 

不同代次（P1/P5/P10）菌体质粒表达量
 

 

连续三批次质粒生长曲线
 

 

纯化工艺开发经验
 

1. 三步层析：
1) 凝胶过滤层析，有效去除宿主DNA残留


 
2) 亲和层析，去除开环质粒

 
3) 阴离子交换层析，去除内毒素

步骤	DNA总量(mg)	收率	宿主DNA (μg /mg)	内毒素 (EU/mg)	超螺旋质粒纯度 (HPLC法)
凝胶过滤	88.3	NA	5.6	<200	83.91%
亲和层析	67.9	76.9%	1.5	<3.7	91.46%
离子交换	63.0	92.8%	1.1	<0.34	92.46%

 

稳定性研究
 

时间、温度对质粒纯度及含量变化的影响