慢病毒 腺相关病毒
腺相关病毒

腺相关病毒

  腺相关病毒(Adeno-Associated Viral Vector,AAV)属微小病毒科,是一类无法自主复制、无包膜的二十面体微小病毒,直径约为20-26nm,单链线状 DNA结构。
  目前AAV有13种血清型(即AAV1-AAV13),不同的血清型对组织或器官有着不同的亲和性,其中AAV2、AAV3、AAV9源自人类本身,是迄今研究最为彻底、应用最为广泛的腺相关病毒载体。
AAV基因组及其编码的蛋白(Eloise Hudry, et al,Neuron,2019)
 
  目前临床研究中采用的重组腺相关病毒载体(Recombination adeno-associated virus, rAAV)是在非致病的野生型AAV基础上改造而成的基因载体。由于其种类多样、免疫原性极低、安全性高、宿主细胞范围广(对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力)、扩散能力强、体内表达基因时间长等,rAAV被视为最有前途的基因研究和基因治疗载体之一。临床上,AAV在眼科疾病、神经系统疾病、代谢类疾病中广泛应用,是FDA批准上市的基因治疗药物中最安全的病毒载体之一。
  在AAV包装过程中,和元GMP平台采用三质粒系统,包装质粒负责编码外源目的基因以及两个末端反向重复序列(ITR,对于病毒的复制和包装具有决定性作用),辅助质粒包含AAV包装所需的 Cap(编码病毒衣壳蛋白)和 Rep(参与病毒的复制)基因,以及腺病毒Helper质粒。三种质粒在生物反应器中共同转染人源293T细胞,开始复制和大规模生产。
  和元GMP平台致力于前期改造AAV病毒载体、优化上游大肠杆菌发酵工艺和下游细胞培养技术,以提高AAV病毒载体的容量和特异性、提升质粒的产量和纯度以及病毒的滴度和纯度等指标。目前AAV病毒独立生产线1条,可同时进行3-4批次连续生产,20-200L一次性反应器可实现细胞大规模培养及稳定生产,上游AAV表达病毒滴度可达5*1011copies/mL,每批可生产高达2*1016AAV制剂。

  生产流程

  平台按照ISO、GLP和GMP等法规规定进行生产管理,实时形成注册申报材料。专业的QA人员全过程监管,负责全面的质量管理工作,同时配备经验丰富的QC人员及先进的检测设备,进行严格的质量把控。
 
  服务优势
  ♦不同批次间病毒生产稳定;
  ♦质粒产量高,病毒滴度高;
  ♦病毒纯度高,杂质含量低,降低毒性;
  ♦全程参考GMP标准进行质量监管,放行标准严格,确保病毒稳定、高质量;
  ♦生产工艺成熟稳定,降低时间成本和资金成本。
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